食品中栀子黄的测定方法-行业标准-消费指南-益农网-农副产品专业交易平台

　　栀子黄作为食品着色剂已经列入GB 2760—1996食品添加剂使用卫生标准，最大使用量0．3g/kg。目前日本用气相色谱方法测定，我们用高压液相色谱法测定。本方法快速、准确、精密度好。
　　本标准由中华人民共和国卫生部提出。
　　本标准由中国预防医学科学院劳动卫生与职业病研究所负责起草；卫生部食品卫生监督检验所参加起草。
　　本标准主要起草人：李严巍、王梅、杨祖英。
　　本标准由卫生部委托技术归口单位中国预防医学科学院负责解释。

　　1　范围

　　本标准规定了食品中栀子黄色素的高效液相测定方法和薄层色谱法。
　　本标准适用于饮料、酒、糕点中栀子黄的测定。

　　第一法　高效液相色谱法

　　2　原理

　　样品中栀子黄经提取净化后，用高效液相色谱法测定，以保留时间定性、峰高定量，栀子甙是栀子黄的主要成分，为对照品。

　　3　试剂

　　试剂均为分析纯，水为蒸馏水。
　　3.1　甲醇。
　　3.2　石油醚：60～90℃。
　　3.3　乙酸乙酯。
　　3.4　三氯甲烷。
　　3.5　姜黄色素。
　　3.6　栀子甙。
　　3.7　栀子甙标准溶液：称取2.75mg栀子甙标准品，用甲醇溶解，并用甲醇稀释至100mL混匀。即得27.5μg/mL栀子甙。
　　3.8　栀子甙标准使用液：分别吸取栀子甙标准溶液0，2.0，4.0，6.0，8.0mL于10mL容量瓶中，加甲醇定容至10mL，即得0，5.5，11.0，16.5，22.0μg/mL的栀子甙标准系列溶液。

　　4　仪器

　　4.1　小型粉碎机。
　　4.2　恒温水浴。
　　4.3　高效液相色谱系统：Water′s M501泵，U6K进样器，岛津RF－535。
　　荧光检测器，Blue chip/PC计算机和Baseline 810色谱控制程序。

　　5　分析步骤

　　5.1　样品处理
　　5.1.1　饮料：将样品温热，搅拌除去二氧化碳或超声脱气，摇匀后，通过微孔滤膜0.4μm过滤，滤液备作HPLC分析用。
　　5.1.2　酒：样品通过微孔滤膜过滤，滤液备作HPLC分析用。
　　5.1.3　糕点：称取10g样品放入100mL的圆底烧瓶中，用50mL石油醚加热回流30min，置室温。砂芯漏斗过滤，用石油醚洗涤残渣5次，洗液并入滤液中，减压浓缩石油醚提取液，残渣放入通风橱至无石油醚味。用甲醇提取3～5次，每次30mL，直至提取液无栀子黄颜色，用砂芯漏斗过滤，滤液通过微孔滤膜过滤，滤液贮于冰箱备用。
　　5.2　测定
　　5.2.1　HPLC参考条件
　　色谱柱：粒度5μm ODS C18150mm×4.6mm
　　流动相：甲醇：水(35∶65)
　　流速：0.8mL/min
　　波长：240nm
　　5.2.2　标准曲线
　　在本实验条件下，分别注入栀子甙标准使用液0，2，4，6，8μL，进行HPLC分析，然后以峰高对栀子甙浓度作标准曲线。
　　5.2.3　样品测定
　　在实验条件下，注入5μL“5.1”项下的样品处理液，进行HPLC分析，取其峰与标准比较，测得样品中栀子甙含量。

　　6　结果

　　6.1　计算
　　按式(1)计算。
　　式中：X——样品中栀子黄色素的含量，g/Kg；
　　A——进样液中栀子甙的含量，μg；
　　V——样品制备液体积，mL；
　　m一一样品质量，g。
　　6.2　本标准的检测限、回收率、精密度。
　　本方法栀子甙的检测限为3.2μg/mL，栀子黄色素浓度在0.2～0.3g/kg范围内，饮料、酒、蛋糕回收率分别为94.1%，92%，91.3%。相对标准差(R.S.D)%：2.69，4.70，3.20。

　　第二法　薄层色谱法

　　1　原理

　　样品中栀子黄色素用有机溶剂提取，并经过纯化处理，去除干扰物质，浓缩点样展开后，在UV254nm灯下呈黑色斑点，与标准比较进行定性，及概略定量。

　　2　试剂

　　所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水。
　　2.1　甲醇。
　　2.2　乙醇。
　　2.3　乙酸乙酯。
　　2.4　丙酮。
　　2.5　甲酸。
　　2.6　三氯甲烷。
　　2.7　硅胶GF254：薄层色谱用。
　　2.8　展开剂：乙酸乙酯：丙酮：甲醇：水(5∶5∶1∶1)。
　　2.9　展开剂：三氯甲烷：甲醇(6∶3)。

　　3　仪器

　　3.1　全玻璃浓缩器。
　　3.2　薄层板涂布器。
　　3.3　玻璃板，4cm×20cm，20cm×20cm。
　　3.4　层析缸。
　　3.5　UV254 nm荧光灯。
　　3.6　微量注射器。

　　4　操作方法

　　4.1　样品处理：将酒、饮料、蛋糕样品处理后，进行TLC检识。见5.2.2展开结果。
　　4.1.1　酒：取样品100mL，减压浓缩至无酒味，然后用乙酸乙酯萃取，每次30mL，萃取3～5次，至无桅子黄颜色为止，合并萃取液，减压浓缩至无乙酸乙酯味。约剩20mL为止，此液留作薄层分析用。
　　4.1.2　饮料：取样品100mL，用乙酸乙酯萃取，每次50mL，萃取3～5次，至无栀子黄颜色为止。合并萃取液，减压浓缩至无乙酸乙酯味，约剩20mL，此液留作薄层分析用。
　　4.1.3　蛋糕：称取10.0g已粉碎均匀的样品，加海沙少许，混匀，用热风吹干样品(用手摸已干燥即可)，加入50mL石油醚搅拌，放置片刻，弃去石油醚，如此反复处理三次，以除去脂肪，吹干后研细，放入索式提取器，用甲醇提取色素，直到无栀子黄色素为止，直至色素全部提完，置水浴浓缩至约5mL，此液留作薄层层析用。
　　4.2　测定
　　4.2.1　点样：取市售硅胶GF254荧光板，离板底边2cm处点样品提取液0.5μL，板的右边点2μL栀子黄色素标准溶液。
　　4.2.2　展开：将4.2.1项已点好样和标准板，用2.8，2.9展开剂展开，待栀子黄色素明显分开后取出，晾干，与标准斑点比较，栀子黄Rf值为0.64和0.50。而姜黄色素为0.11和0.15。样品与标品的斑点的Rf值一致，则证明样品中的色素为栀子黄色素。

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