谷物籽粒色氨酸测定法-行业标准-消费指南-益农网-农副产品专业交易平台

    1 适用范围
　　本标准适用于测定谷物籽粒色氨酸含量。
    2 原理
　　谷物蛋白质碱解后，降解成肽和游离的氨基酸。在酸性介质中，有硝酸盐存在条件下，色氨酸吲哚环与对二甲胺基苯甲醛反应，生成蓝色化合物，在一定范围内颜色深浅与色氨酸含量成正比。
    3 仪器、设备
    3.1 分析天平，感量0.1mg。
    3.2 实验室用粉碎机。
    3.3 721型分光光度计，或相当的仪器。
    3.4 离心机，4000r/min。
    3.5 培养箱。
    3.6 20ml具塞刻度玻璃试管（须校准）。
    4 试剂
　　除注明者外均为分析纯。水为蒸馏水。
    4.1 浓盐酸（GB 622—77），比重1.19。
    4.2 10％盐酸溶液：22.7ml浓盐酸加水至100ml。
    4.3 5％对二甲胺基苯甲醛（HGB 3486—62）溶液：5g 对二甲胺基苯甲醛溶于10％盐酸中，并定容100ml。
    4.4 1％硝酸钠（GB 636—77）水溶液（m/V）。
    注：4℃冰箱中保存，一周内使用有效。
    4.5 10％氢氧化钾（GB 2306—80）水溶液（m/V）。
    4.6 L-色氨酸，层析纯。
    4.7 L-色氨酸标准溶液：准确称25mgL-色氨酸（105℃干燥2h），加少量0.1mol/L氢氧化钠（GB 629—81）使之溶解，定量地转移到250ml棕色容量瓶中，用水定容。浓度为100μg/ml。
    注：4℃冰箱中保存，一个月内使用有效。
    5 试样的选取与制备
    5.1 选取具有代表性谷物籽粒，挑拣干净，按四分法缩减取样，样量不得少于20g。籽粒充分风干后用粉碎机磨碎（带壳籽粒先脱壳），使95％以上通过0.25mm孔径筛。
    5.2 按GB 2906—82《谷类、油料作物种子粗脂肪测定法》脱脂并测定脂肪含量。脱脂样品风干后，混匀，装入磨口瓶中备用。
    6 校准曲线的绘制
　　吸L-色氨酸标准溶液0.2，0.3，0.4，0.5，0.6，0.7ml分别置于20ml具塞刻度玻璃试管中，加1ml10％氢氧化钾溶液，摇匀；加0.2ml5％对二甲胺基苯甲醛，摇匀；加0.2ml1％硝酸钠，摇匀；将试管置于冰水中，再加5ml浓盐酸。取出试管，强烈振摇后放入25℃培养箱中显色75min（温度升到25℃时记时），取出后用水稀释至刻度，摇匀。以试剂空白作对照在590nm波长处测读吸光度。以色氨酸含量（μg）为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制校准曲线。在温度较高的季节和地区，制定校准曲线时，参见附录A。
    7 测定步骤
    7.1 称样：称取40mg试样两份，准确至0.1mg，与此同时，另称样品，按GB 3523 —83《谷类、油料作物种子水分测定法》测定水分含量。
    7.2 水解：将试样置于20ml具塞刻度玻璃试管中，加1ml10％氢氧化钾，振摇，样品全部湿润后，放入40℃培养箱中水解16～18h。
    7.3 显色：从培养箱中取出试管冷至室温后加0. 2ml5％对二甲胺基苯甲醛，摇匀；加0.2ml1％硝酸钠，摇匀；将试管置于冰水中，再加5ml浓盐酸。取出试管，强烈振摇后置于40℃培养箱中显色45min（温度升到4℃时记时）。
    7.4 测定：取出试管冷至室温后，用水稀释至刻度，摇匀。以4000r/min离心10min。取上清液以试剂空白作对照，在590nm波长处测读吸光度。
    8 结果计算
    8.1 计算公式
    式中：m──
    试样质量，mg；
    α──
    从校准曲线上查得的色氨酸含量，μg；
    H──
    试样水分百分率。
    8.2 结果的表示
    两个平行样品的测定结果用算术平均值表示，保留有效数字两位，第三位数按GB 1.1—81《标准化工作导则编写标准的一般规定》附录C规定取舍。
    8.3 允许差
    两个平行样品色氨酸测定值为0.10％以下时，相对差允许为8％；0.10％或 0.10％以上时为5％。
    ①　为脱脂试样的色氨酸百分含量，换算成原样品的色氨酸含量应乘以系数（1-脂肪％）。如脂肪含量为4％以下时，二个结果在允许差之内。

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