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1 主题内容与适用范围
本标准规定了食品中环己基氨基磺酸钠的三种测定方法－－气相色谱法、比色法、薄层层析法
本标准气相色谱法及比色法适用于饮料、凉果等食品中环己基氨基磺酸钠的测定；薄层层折法适用于饮料、果汁、果酱、糕点中环己基氨基磺酸钠的含量测定，样品中含有0．1 g/kg环己基氨基磺酸钠即可检出，最低检出量为3一4μg环己基氨基磺酸钠。
第一篇气相色谱法
2 原理
在硫酸介质中环己基氨基磺酸钠与亚硝酸反应，生成环己醇亚硝酸酯．利用气相色谱法进行定性和定量。
3 试剂
本标准所用试剂，凡未指明规格者，均为分析纯（AR）．水为蒸馏水。
3．1正己烷。
3．2氯化钠。
3．3层析硅胶（或海砂）。
3·4 50g亚硝酸钠溶液。
3·5 100g/L硫酸溶液。
3·6 环己基氨基磺酸钠标准溶液（含环己基氨基磺酸钠，98％）：精确称取1．000 0 g。 环己基氨基磺酸钠加入水溶解并定容至100 mL，此溶液每毫升含环己基氨基磺酸钠10 mg.
4 仪器
4．1气相色谱仪附氢火焰离子化检测器。
4．2旋涡混合器。
4．3离心机。
4．4 10μL微量注射器。
4．5色谱条件
4．5．1色谱柱：长2m，内径3mm，U形不锈钢柱。
4，5．2 固定相：Chromosorb W AW DMCS 80一100目，涂以10％ SE－30。
4．5．2 测定条件
柱温： 80℃汽化温度： 150℃检测温度： 150℃。
流速：氮气40 mL、min;氢气30 mL/min;空气300 mL/min。
5 样品处埋
5．1液体样品：摇匀后直接称取。含二氧化碳的样品先加热除去，含酒精的样品加40g/L 氢氧化钠溶液调至碱性，于沸水浴中加热除去，制成试样。
5．2固体样品：凉果、蜜饯类样品将其剪碎制成试样。
6 分析步骤
6．1试料制备
6．1．1液体试样：称取20．0g试样于100 mL带塞比色管，置冰浴中。
6．1．2固体试样：称取2．0g已剪碎的试样于研钵中，加少许层析硅胶（或海砂）研磨至呈干粉状，经漏斗倒入100 mL容量瓶中，加水冲洗研钵，并将洗液一并转移至容量瓶中。加水至刻度，不时摇动，1h后过滤，即得试料，准确吸取20 mL于100 mL带塞比色管，置冰浴中。
6．2测定
6．2．1标准曲线的制备：准确吸取1．00 mL环己基氨基磺酸钠标准溶液于100 mL带寒比色管中，加水20 mL．置冰浴中，加入5mL 50 g/L亚硝酸钠溶液，5mL 100g/L硫酸溶液，摇匀，在冰浴中放置30 min，并经常摇动，然后准确加入10 mL正己烷，5g氯化钠，摇匀后置旋涡混合器上振动1min（或振摇80次），待静止分层后吸出己烷层于10 mL带塞离心管中进行离心分离，每毫升己烷提取液相当1mg环己基氨基磺酸钠，将标准提取液进样1．－5μL于气相色谱仪中，根据响应值绘制标准曲线。
6．2．2样品管按6．2．1自“加入5mL 50g/L亚硝酸钠溶液……”起依法操作，然后将试 料同样进样1一5 μL．测得响应值，从标准线图中查出相应含量。
7 计算
A×10×1000 10A
X＝---------------------- ＝-------------- ······（1）
m×V×1000 mV
式中：X一样品中环己基氨基磺酸钠的含量，g/kg；
m一样品质量，g；
V一进样体积，μL；
10一正己烷加入量，mL；
A一测定用试料中环己基氨基磺酸纳的含量，μg.
8 精密度和允许误差
重复测定变异系数<7%.
两次平行测定相对允许误差绝对值主≤10％．平行测定结果用算术平均值表示，保留二位小数。
第二篇比色法
9 原理
在硫酸介质中环己基氨基磺酸钠与亚硝酸钠反应，生成环己醇业硝酸酯，与磺胺重氮化后再与盐酸萘乙二胺偶合生成红色染料，在550nm波长测其吸光度，于标准比较定量。
10试剂
10．1三氯甲烷。
10．2甲醇。
10．3透析剂：称取0．5g二氯化汞和12．5g氮化钠于烧杯中，以0．01 mol/L盐酸溶液定容至100 mL。
10．4 100g/L亚硝酸钠溶液…
10．5 100g/L硫酸溶液
10．6 100 g/L尿素溶液（临用时新配或冰箱保存）。
10．7 100 g/L盐酸溶液
10．8 10g/L磺胺溶液：称取1g磺胺溶于10%盐酸溶液中，最后定容至100 mL。
10．9 1g／L盐酸素乙二胺溶液。
10．10 环己基氨基磺酸钠标准溶液：精确称取0．100 0g环己基氨基磺酸钠，加水溶解，最后定容至100 mL，此溶液每毫升含环己基氨基磺酸钠1m.临用时将环己基氨基磺酸钠标准溶液稀释10倍。此液每毫升含环己基氨基磺酸钠 0．1mg。
11 仪器
11．1 分光光度计。
11．2旋涡混合器。
11．3离心机。
11．4透析纸。
12 试样处理
同第5章。
13 分析步骤
13.1提取
13．1．1液体试料：称取10．Og试料于透析纸中，加10 mL透折剂，将透折纸口扎紧。 放入盛有100 mL水的200 mL广口瓶内，加盖，透析20～24 h得透析液。
13．1．2固体试料：准确吸取10．0 mL经“6．1．2”处理后的试料提取液于透折纸中，以下操作按“13．1．1”项下进行。
13．2测定
13．2．1 取2支50 mL带塞比色管，分别加入10 mL透析液和10 mL标准液，于0- 3℃冰浴中，加入1mL l0 g/L亚硝酸钠溶液， 1 mL l00 g/L硫酸溶液，摇匀后放人冰水中不时摇动，放置1h，取出后加15 mL三氯甲烷，置旋涡混合器上振动1min．静置后吸去上层液。再加15 mL水，振动1min，静止后吸去上层液，加10 mL100g/L尿素溶液， 2 mL 100 g/L盐酸溶液，再振动5min，静置后吸去上层液，加15 mL水，振动1min，静置后吸去上层液，分别准确吸出5mL三氯甲烷于2支25 mL比色管中。
另取一支25 mL比色管加入5mL三氯甲烷作参比管。
于各管中加入15 mL甲醇， l mL l0 g/L磺胺，置冰水中15 min，取出回复常温后加入1mL l g/L盐酸萘乙二胺溶液，加甲醇至刻度，在15～30℃下放置20一30 min，用1cm比色杯于波长550 nm处测定吸光度，测得吸光度A5及A0。
13．2．2另取2支50 mL带塞比色管，分别加入10 mL水和10 mL透析液，除不加10 g/L亚硝酸钠外，其他按“13．2．1”项下进行，测得吸光度A50及A0。
14 计算
c A-A0 100+10 1 1000
X= ------×----------×-----------×----------×----------
m A5-A50 V 1000 1000
式中：X一样品中环己基氨基磺酸钠的含量，g/kg：
m一样品质量，g;
V一透折液用量，mL；
c一标淮管浓度，μg/mL;
A5一标准液吸光度；
A50 一 水的吸光度；
A一试料透析液吸光度：
A0一不加亚硝酸钠的试料透析液吸光度。
15 精密度和允许误差
重复测定变异系数「10％。
两次平行测定相对允许误差绝对值≤10％，平行测定结果用算术平均值表示，保留二位小数。
第三篇簿层层析法
16 原理
样品经酸化后，用乙醚提取，将样品提取液浓缩，点于聚酚胺薄层板上，展开，经显色后，根据薄层板上环己基氨基磺酸钠的比移值及显色斑深浅，与标准比较进入定性、概略定量。
17 试剂
除另有规定外，所用的试剂为分析纯试剂，水为蒸馏水或同等纯度水。
17．1异丙醇。
17．2正丁醇。
17，3石油醚：沸程30～60℃。
17．4 乙醚（不含过氧化物).
17．5 氢氧化胺。
17．6 无水乙醇。
17．7 氯化钠。
17．8硫酸钠。
17．9 c(HCI）= 6 mol/L盐酸：取50 mL盐酸加到少量水中，再用水稀释至100 mL.
17．10聚酞胺粉（尼龙-6）： 200目。
17．11环己基氨基磺酸标准溶液：精密称取0．020 0g环己基氨基磺酸，用少量无水乙醇溶解后移人10 mL容量瓶中，并稀释到刻度，此溶液每毫升相当于2mg 环已基氨基磺酸，二周后重新配制（环己基氨基磺酸的熔点： 16g一170℃)。
17．12展开剂
17．12．1正丁醇-浓氨水-无水乙醇（20＋1＋1).
17．12．2异丙醇－浓氨水－无水乙醇（20＋1＋l）。
17．13显色剂：称取0．040g溴甲酚紫溶于100 mL 50％乙醇溶液，用1．2 mL 0．4％氢氧化钠溶液调至pH 8。
18 仪器
18．1吹风机。
18．2层析缸。
18，3玻璃板：5 cm X 20 cm。
18．0微量注射器：10μL。
18．5玻璃喷雾器。
19 分析步骤
19．1样品提取
19．1．1饮料、果酱：称取2．5g（mL）已经混合均匀的样品(汽水需加热去除二氧化碳），置于25 mL带塞量简中，加氯化钠至饱和（约1g)，加以5mL c（HCL），6 mol/L盐酸酸化，用15、10 mL乙醚提取两次，每次振摇1min，静止分层，用滴管将上层乙醚提取液通过无水硫酸钠滤入25 mL容量瓶中，用少量乙醚洗无水硫酸钠，加乙醚至刻度，混匀。吸取10．0mL乙醚提取液分两次置于10 mL带塞离心管中，在约40℃水浴上挥发至干，加入0．1mL无水乙醇溶解残渣，备用。
19．1．2糕点：称取2．5g糕点样品，研碎，置于25mL带塞量筒中，用石油醚提取3 次，每次20 mL，每次振摇3min，弃去石油醚，让样品挥干后（在通风橱中不断搅拌样品，以除去石油醚），加入0．5 mL c（HCI）=6 mol/L盐酸酸化，再加约1g氯化钠，以下按19．1．1自“用15、10 mL乙醚提取2次………”起依法操作。
19．2测定
l9．2．1聚酞胺粉板的制备：称取4g聚酚胺粉，加1.0g可溶性淀粉，加约14 mL水研磨均匀合适为止，立即倒入涂布器内制成面积为5cm×20 cm，厚度为0. 3 mm的薄层板6块，室温干燥后，于80℃干燥1h，取出，置于干燥器中保存、备用。
l9．2．2点样：薄层板下端2cm的基线上，用微量注射器于板中间点4μg样品液，两侧各点2μL、3μL环己基氮基磺酸标准液。
19.2.3展开与显色：将点样后的薄层板放入预先盛有展开剂（17．12．1或
17．12．2）的展开槽内，展开槽周围贴有滤纸，待溶剂前沿上展至10 cm以上时，取出在空气中挥干，喷显色剂其斑点成黄色，背景为蓝色。样品中环己基氨基磺酸的量与标准斑点深浅比较定量（用17．12．2展开剂时，环己基氨基磺酸的比移值约为0．47，山梨酸0．73，苯甲酸0．61,糖精0．31。
20 计算
A×1000×1.12 2.8A×V1
X＝-----------------------=------------------ …………（3）
10 V2 m×V2
m×-------×-------×1000
25 V1
式中：X一样品中环己基氨基磺酸钠的含量，g/kg或g/L;
A一样品点相当于环己基氨基磺酸的质量，mg;
m一样品质量，g;
V1一加入无水乙醇的体积，mL;
V2一测定时点样的体积,mL；
10一测定时吸取乙醚提取液的体积，mL;
25一样品乙醚提取液，总体积,mL;
1．12一1．00 g环己基氨基磺酸相当环己基氨基磺酸钠的质量，g.
21 精密度
重复测定变异系数≤28％。
本方法可以同时测定山梨酸、苯甲酸、糖精等成分。
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